Мясо пептонный агар как приготовить


Приготовление мясо-пептонного агара — Студопедия

К 100 мл мясного бульона добавляют 1 % пептона Пептон- это продукт ферментативного гидролиза белков. Добавляют пептон в среду для увеличения ее питательности, для уплотнения среды в нее добавляют от 2 до 4 % агар-агара

Питательная среда д.б. слабокислой по отношению к цитоплазме микроорганизмов, которые будут выращиваться в ней. Для этого в среду добавляют 0,5% поваренной соли. Реакция среды от 7,0 до 7,4. После введения агар-агара смесь прогревают до неполного студнеобразования.

Приготовление мясо-пептонногожелатина.

Эта среда готовится аналогично МПА, но для уплотнения ее применяют на агар-агар, желатин в количестве 10-12% . МПЖ имеет ряд преимуществ перед МПА. Он Лучше соединяется со стеклом, гнилостные бактерии образуют при росте на этой среде весьма характерные колонии, кроме того, некоторые из гнилостных бактерий обладают способностью разжижать желатин, что очень важно для определения вида бактерий. Но МПЖ' плавится при температуре 30-37 0С, в этом его недостаток.

Дня изучения биохимических признаков микроорганизмов пользуются дифференциально-фагностическими средами. Примером таких сред могут служить среды Гисса. Их применяют для изучения способности м.о. ферментировать углеводы.

В состав сред Гисса входит 1% какого-либо углевода, 1% агар-агара и индикатор. Примером такой среды является и среда Эндо, применяемая для выделения Bact. coli. В состав этой среды входит, кроме МПА, насыщенный спиртовой раствор фуксина, 1% лактозы Na2SO3 , рН 7-7,2 Bact. coli дает на среде Эндо колонии с металлическим блеском. Для изучения плесневых грибов используют среду Сабуро, следующего состава: 1% глюкозы, 1% пептона, 2% агар-агара рН 5-5.6.


ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ:

Приготовить 100 мл МПА:

1. В кастрюлю напивают воду и ставят на горелку - готовят водяную баню.

2. В колбу наливают 100 мл МБ. Взвешивают 2 г. пептона. 0,5 г. агар-агара. Все это помещают в колбу с мясным бульоном.

3. Колбу ставят в кастрюлю с горячей водой и содержимое колбы подогревают до тех пор пока полностью не расплавится агар-агар и среда не станет однородной. Затем добавляют соды (до слабощелочной реакции по лакмусу).

4. Расплавленную среду разливают в пробирки по 10 мл.

5. Готовят ватные пробирки, обтягивают их марлей и закрывают пробки с приготовленной питательной средой.

6. Пробирки с МПА помещают в корзины. Сдают лаборанту для стерилизации.


Классификация питательных сред

По составу питательную среду подразделяют на 2 группы: натуральные среды неопределенного состава и синтетические среды.

Натуральными обычно называют среды, которые состоят из продуктов животного или растительного происхождения, имеющих сложный неопределенный хим. состав. Основой таких сред являются различные части зеленых растений, животные ткани. солод, дрожжи, фрукты, овощи... Большинство из них используется в виде экстрактов или настоев. Однако среды с неопределенным составом малопригодны для изучения физиологии обмена веществ микроорганизмов, поскольку они не позволяют учесть потребление ряда компонентов среды, а с другой стороны выявить, какие вещества образуются по ходу развития м.о. Это связано с тем, что состав натуральных питательных сред очень сложен, кроме того он не является постоянным. Натуральные среды неопределенного состава используются главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и диагностических целей. К числу сред неопределенного состава относят и так называемые среды «полусинтетические». В их состав наряду с известными хим. соединениями входят вещества неопределенного состава Такие среды находят широкое применение в пром. микробиологии для получения аминокислот, витаминов и антибиотиков. В качестве примера таких сред можно назвать: мясопептонная среда, в состав которой одновременно с мясным экстрактом и пептоном входит поваренная соль, фосфорнокислый каши, иногда глюкоза или сахароза, картофельные среды с глюкозой или пептоном.

Синтетические среды - это такие среды в состав которых входят только определенные , химически чистые соединения, взятые в точно указанных концентрациях. Синтетические среды могут иметь относительно большой набор компонентов, но могут быть довольно простыми по составу. Синтетические среды наиболее удобны для исследования обмена веществ микроорганизмов. Зная точный состав и количество входящих в среду компонентов, можно изучить их потребление и превращение в соответствующие продукты обмена

По назначению : различают элективные и дифференциально-диагностические среды

Элективные среды обеспечивают развитие преимущественно одного вида м.о. или группы родственных микроорганизмов (менее пригодны или совсем не пригодны для развития других). Такие среды применяют главным образом для выделения.

Микроорганизмов из мест их естественного обитания, для получения накопительных культур.

Дифференциально-диагностические среды: это такие среды, которые позволяют по возможности очень быстро отличить (дифференцировать) одни виды м.о. от других. Их состав подбирается с таким расчётом, чтобы он позволил чётко выявить наиболее характерные свойства данного вида м.о. Нередко это достигается введением в среды специальных красителей-индикаторов.

По физическому состоянию среды разделяют на жидкие, плотные и сыпучие. Для выяснения физиолого-биохимических особенностей микроорганизмов, а также для накопления их биомассы или продуктов обмена наиболее удобно применять жидкие среды. Плотные среды используют для выделения чистых культур. В промышленной биологии применяют так называемые сыпучие среды. К ним относятся разваренное пшено, пропитанное питательным раствором.

Вопросы для самоконтроля:

1. Что принято считать питательными средами?

2. Как классифицируют их по агрегатному состоянию?

3. Как делятся питательные среды по назначению? В каких случаях удобнее применять те или иные среды?

4. Какие среды называют дифференциально-диагностическими?

5. Как готовят питательные среды? Какие студнеобразователи чаще всего применяют?

6. Что входит в состав МПА? Как его готовят?

7. Чем отличается МПА от МПЖ?

Домашнее задание:

1. Оформление отчета по лабораторному занятию.

2. Подготовиться к защите лабораторного занятия.

Лабораторная работа № 5

Питательный агар

: состав, подготовка и применение

Питательный агар

- это питательная среда общего назначения, используемая для культивирования микробов, поддерживающих рост широкого круга неприхотливых организмов. Питательный агар популярен, потому что он может выращивать различные типы бактерий и грибов и содержит много питательных веществ, необходимых для роста бактерий.

Состав питательного агара

Это ферментативный гидролизат животного белка. Пептон является основным источником органического азота для растущих бактерий.

  • 0,3% экстракт говядины / дрожжевой экстракт

Это водорастворимые вещества, способствующие росту бактерий, такие как витамины, углеводы, органические соединения азота и соли.

Это отвердитель.

Присутствие хлорида натрия в питательном агаре поддерживает концентрацию соли в среде, аналогичную цитоплазме микроорганизмов.

Вода необходима для роста и размножения микроорганизмов, а также обеспечивает среду, через которую могут транспортироваться различные питательные вещества.

  • pH доводится до нейтрального (7,4) при 25 ° C.
  Приготовление питательного агара  

1. Развести 28 г порошка питательного агара в 1 литре дистиллированной воды.

2. Нагрейте эту смесь при перемешивании до полного растворения всех компонентов.

3. Автоклав растворенную смесь при 121 градусе Цельсия в течение 15 минут.

4. После автоклавирования питательного агара дайте ему остыть, но не затвердеть.

5.Налейте питательный агар в каждую чашку и оставьте чашки на стерильной поверхности, пока агар не затвердеет.

6. Закройте каждую чашку Петри крышкой и храните чашки в холодильнике.

  Использование агара с питательными веществами  

1. Он часто используется для выделения и очистки культур.

2. Его также можно использовать в качестве средства для выращивания бактериальных газонов, необходимых для тестов на чувствительность к антибиотикам. На самом деле, тестирование чувствительности к антибиотикам обычно проводится на средах, специально разработанных для этой цели.

  Рисунки  
Четыре чашки с питательным агаром для выращивания колоний обычных грамотрицательных бактерий.
Источник: Википедия.

Как готовить с агар-агаром

Агар-агар - желирующий агент, извлекаемый из красных водорослей, который в основном используется для застывания желе. Поскольку желатин производится из животного коллагена, агар-агар является жизнеспособной вегетарианской альтернативой. Когда продается полосами, он все еще напоминает водоросли. Хотя это традиционное представление агар-агара в Юго-Восточной Азии, в Великобритании он чаще всего встречается в порошкообразной или хлопьевидной форме.

Агар-агар не имеет запаха, не оставляет окраски или остатков.Ингредиент можно обнаружить только по ощущению во рту от застывшего желе. Когда желатин используется для застывания желе, у них такая низкая температура плавления, что они буквально тают во рту. Когда агар-агар используется для застывания желе, у них более высокая температура плавления, а это означает, что тепла во рту обедающих недостаточно, чтобы растопить желе. Результат - отличительная стойкость. Высокая температура схватывания агар-агара делает его особенно популярным ингредиентом в жарких странах, поскольку желатиновые пудинги растают, если оставить их на солнце, и он также оказывается полезным при добавлении пикантных желе на разогретые тарелки для основного блюда.

Агар-агар с низким содержанием насыщенных жиров и высоким содержанием минералов. Его часто можно найти в магазинах здорового питания или специализированных веганских или вегетарианских магазинах. Также ищите агар-агар в мировых продовольственных рядах больших супермаркетов или в специализированных японских отделах.

.

АГАР МЯСНОГО ЭКСТРАКТА КАЗЕИН-ПЕПТОНОВОГО ДЕКСТРОЗА

АГАР МЯСНОГО ЭКСТРАКТА КАЗЕИН-ПЕПТОНОВОГО ДЕКСТРОЗА Свойства

темп хранения.
Хранить при температуре от + 15 ° C до + 25 ° C.
PH
7 (21 г / л, h3O, 30 ° C)

БЕЗОПАСНОСТЬ

  • Заявление о рисках и безопасности
WGK Германия WGK 1 небольшая опасность для воды
Код ТН ВЭД 3821 00 00

АГАР МЯСНОГО ЭКСТРАКТА КАЗЕИН-ПЕПТОНОВОГО ДЕКСТРОЗА цена Подробнее (1)

Производитель Номер товара Описание товара Номер CAS Упаковка Цена Обновлено Купить
Сигма-Олдрич 1.10128 ТГЕ-агар Триптон-глюкозный мясной экстракт агар для микробиологии 1101280500 $ 187 2020-08-18 Купить

Агар МЯСНОГО ЭКСТРАКТА КАЗЕИН-ПЕПТОНОВОГО ДЕКСТРОЗА Поставщики

Глобальные (1) Поставщики Германия 1Глобальный 1


  • КАЗЕИН-ПЕПТОНОВЫЙ ДЕКСТРОЗ МЯСНЫЙ ЭКСТРАКТ АГАР
  • TGE AGAR
.

Агар МакКонки - чаша, назначение, ингредиенты и принцип

Что такое агар МакКонки?

В чем его значение ? Агар МакКонки - это дифференциальная среда, разработанная Альфредом Теодором МакКонки в 20 веке.

Это как селективная, так и дифференциальная среда, используемая для выделения и дифференциации неприхотливых грамотрицательных палочек, таких как Pseudomonas и Enterobacteriaceae.

В нем используется среда для роста бактерий, которая представляет собой комбинацию питательных веществ, влаги и других химических веществ, необходимых для роста бактерий.Он используется для выращивания бактериальных колоний. (1, 2 и 3)

Рисунок 1: Чашка Петри, содержащая как лактозоположительные, так и лактозотрицательные бактерии.

Источник изображения : blogspot.com

Рисунок 2: Изображения показывают рост Enterobacteriaceae на агаре МакКонки. У него нетронутая тарелка. Бесцветная колония показывает бактерии, не ферментирующие лактозу, тогда как розовые колонии показывают бактерии, ферментирующие лактозу.

Источник изображения : slidesharecdn.com

Компоненты агара МакКонки

Рисунок 3: Различные компоненты агара МакКонки.

Источник изображения : slidesharecdn.com

Панкреатический гидролизат желатина / пептона и протеазного пептона (как мяса, так и казеина) -

Они являются источником питательных веществ, необходимых для роста, таких как витамины, минералы, азот и аминокислоты.

  • Агар - действует как отвердитель.
  • Моногидрат лактозы - Он является источником ферментируемых углеводов, позволяющих проводить дифференциацию.
  • Дистиллированная вода
  • Соли желчных кислот и кристаллический фиолетовый - Они подавляют рост организмов, принадлежащих к семейству грамположительных.
  • Нейтральный красный - Обозначает уровень pH. Если уровень pH ниже 6,8, он становится красным.Бесцветный результат означает, что pH больше 6,8.
  • Хлорид натрия - обеспечивает электролиты, необходимые для транспортировки и осмотического баланса. (2, 3, 4, 5 и 6)

Рисунок 4: Чашка Петри с различными типами бактерий.

Источник изображения : superfarmer.files.wordpress.com

Что такое агар МакКонки Назначение?

Назначение агара МакКонки - изолировать грамотрицательные кишечные бактерии, а также различать ферментирующие лактозу и неферментирующие грамотрицательные бактерии.

Агар МакКонки также полезен для выделения колиформных бактерий и кишечных патогенов, присутствующих в воде, молочных продуктах и ​​других формах биологических образцов. (1, 3 и 6)

Процедура теста на агар МакКонки

  1. Первый шаг - суспендировать 49,53 грамма обезвоженной среды в литре дистиллированной воды.
  2. Доведите до кипения для полного растворения среды.
  3. Автоклав под давлением 15 фунтов или минимум 121 градус Цельсия в течение примерно 15 минут.
  4. Дайте остыть.
  5. Перелейте в стерильную чашку Петри и внимательно посмотрите, что произойдет. (4, 7, 8 и 9)

Результаты агара МакКонки

Как интерпретировать результат агара МакКонки?

  • Штаммы, ферментирующие лактозу - Они становятся красными / розовыми и окружены осажденной кислотой желчью. Изменение цвета вызвано различными факторами, такими как образование кислоты, вторичное по отношению к лактозе, поглощение нейтрального красного цвета и изменение цвета красителя, если уровень pH падает ниже 6.8.
  • Неферментирующие штаммы лактозы - Результаты бесцветные и прозрачные. Внешний вид носителя не изменился. (2, 5, 9 и 10)

Какие бактерии выбираются при использовании агара МакКонки?

Штамм бактерий идентифицируется при использовании агара МакКонки. Сама суть агара МакКонки состоит в том, чтобы различать грамотрицательные бактерии, сбраживающие лактозу, и грамотрицательные бактерии, не ферментирующие лактозу.

Примеры:

  • Ферментация лактозы - Enterobacter aerogenes, Escherichia coli и Klebsiella.
  • Безлактозное брожение - Salmonella typhimurium, Proteus разновидностей, Shigella, Pseudomonas aeruginosa и Yersinia. (1, 3, 6 и 8)

Есть ли ограничения?

Выявленные изолированные организмы дают только предположительный результат. Лучше всего провести процедуру пересева и провести подтверждающий тест для окончательной идентификации.Некоторые штаммы бактерий плохо растут в среде, в то время как другие не могут полностью расти.

Инкубация чашки с агаром MacConkey делает ее чувствительной к увеличению содержания углекислого газа, что может значительно повлиять на рост / уменьшение некоторых штаммов грамотрицательных бацилл. (2, 6 и 9)

Почему агар МакКонки является селективным, а также дифференцированным?

Среда MacConkey идентифицируется как селективная и дифференциальная среда.Это селективная среда в том смысле, что она подавляет рост грамположительных бактерий в первую очередь из-за присутствия в среде солей желчных кислот и кристаллического фиолетового.

По иронии судьбы, это еще и дифференциальная среда, потому что она способна различать различные группы бактерий на основе реакции изменения цвета. Индикатор pH (нейтральный красный) и лактоза выделяют в среде кислоту, которая может значительно снизить уровень pH (ниже 6,8).

Превращает цвет в красный / розовый.С другой стороны, бактерии, не ферментирующие лактозу, не могут использовать лактозу в среде. Вместо этого они будут использовать пептон, что приведет к образованию аммиака, вызывающему повышение pH. В результате образуются колонии от золотистого до коричневого цвета с темными центрами. (3, 6, 9 и 10)

Факты об агаре МакКонки

  1. Агар МакКонки представляет собой модифицированный нейтральный агар с красной желчью, созданный Альфредом Теодором МакКонки.
  2. Это один из первых методов культивирования и идентификации кишечных организмов.
  3. Агар МакКонки полезен для изоляции патогенов, присутствующих в продуктах питания, и бактерий кишечной палочки в образцах воды.
  4. Бактерии, отнесенные к категории ферментирующих лактозу, образуют розовые колонии и окружают зону осадка желчных солей.
  5. Бактерии, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные и прозрачные колонии. Осадки не образуются.

Ссылки:

  1. https: // en.wikipedia.org/wiki/MacConkey_agar
  2. https://microbiologyinfo.com/macconkey-agar-composition-principle-uses-preparation-and-colony-morphology/
  3. http://www.austincc.edu/microbugz/macconkey_agar .php
  4. https://microbeonline.com/macconkey-agar-mac-composition-preparation-uses-and-colony-characteristics/
  5. http://iws2.collin.edu/dcain/CCCCD%20Micro/macconkeyagar. html
  6. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/MacConkeyAgar.html
  7. https: // www.teknova.com/category-s/504.html
  8. https://www.quora.com/How-do-you-prepare-MacConkey-agar
  9. https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/ sigma / m7408? lang = en & region = PH
  10. http://www.scienceprofonline.com/microbiology/macconkeys-agar-mac-differential-selective-bacterial-growth-medium.html

Связанные сообщения:

  • EMB Агар (эозин-метиленовый синий) - пластина, состав и результаты
  • Маннитоловый солевой агар - пластина, тест, состав, подготовка, использование
  • Агар CLED (цистиновый лактозный электролит): состав, подготовка, метод использования и характеристики колоний
  • Агар с декстрозой Сабуро (SDA) - Состав, принцип и применение
  • Тест на дезоксирибонуклеазу (ДНКазу) - принцип, процедура, применение, интерпретация результатов
.

Смотрите также